探究激光輔助孵化方法對胚胎解凍的影響

輔助孵化被用于輔助生殖相關(guān)技術(shù)已具有較長(cháng)的時(shí)間，近幾年隨著(zhù)顯微激光相關(guān)醫學(xué)的快速發(fā)展，激光系統由于具有快速、安全、準確等優(yōu)點(diǎn)而被引入到輔助孵化，且已獲得較好的臨床效果。本文關(guān)于兩種激光輔助孵化方法對人類(lèi)早期胚胎解凍后移植妊娠率的影響進(jìn)行研究分析，所研究的結果報道如下。

1資料和方法

1.1一般資料 將2013年11月到2014年7月期間在我院接受凍融胚胎移植的160例患者作為臨床研究對象，按照隨機的原則分為兩組，每組80例，對照組中患者的年齡為27～40歲，平均年齡為(35.6±1.2)歲，該組患者子宮膜厚度平均值為(10.6±1.2)mm;研究組中患者的年齡為26～39歲，平均年齡為(35.3±1.0)歲，該組患者子宮膜厚度平均值為(10.7±1.6)mm。兩組排除了宮腔因素引起的不孕患者，且年齡、子宮內膜厚度相似，差異無(wú)統計學(xué)意義(P>0.05)，可以進(jìn)行對比分析。

1.2方法

1.2.1 D3胚胎評級 參照胚胎分級1級:胚胎卵裂球大小均勻，形態(tài)規則，透明帶完整;胞質(zhì)均勻清晰，沒(méi)有顆?，F象，碎片0%～5%;2級:胚胎卵裂球大小略不均勻，形態(tài)略不規則，胞質(zhì)可有顆?，F象，碎片10%～20%之間;3級:胚胎卵裂球明顯大小不均，可有明顯的形狀不規則，胞質(zhì)可有顆?，F象，胞質(zhì)碎片21%～50%;4級:胚胎卵裂球大小嚴重不均，胞質(zhì)可有嚴重顆?，F象，胞質(zhì)碎片>50%。

1.2.2 冷凍胚胎 選擇(1)正常受精;(2)D1、D2、D3連續發(fā)育;(3)D2在2細胞以上，D3卵裂球數≥6個(gè);(4)胚胎評級2級以上;解凍后胚胎移植的標準:胚胎解凍后有超過(guò)50%的卵裂球存活的胚胎認為胚胎解凍后復蘇，并用于移植。

1.2.3 胚胎慢速程序冷凍及解凍法 (1)胚胎冷凍:冷凍試劑盒Quinn’s胚胎冷凍配套培養基。操作步驟:胚胎于37℃移入Fl(冷凍稀釋培養基(含10%SPS的HEPES液))中，將胚胎在培養皿的不同區域反復沖洗，放置10min;移入F2(1.5MPPD溶液)中，于室溫平衡10min;移入F3(1.5MPPD+0.1M蔗糖溶液)中，裝入冷凍麥管并封好管口。將冷凍管置入已在起始溫度的程序冷凍儀中，開(kāi)始冷凍從室溫(25℃)開(kāi)始，以2℃/min的速度從室溫降至-8℃，當溫度穩定在-8℃時(shí)，進(jìn)行植冰，并停留10min，之后以-0.3℃/min的速度從-8℃降至-30℃，再以10℃/min的速度從-30℃降至-150℃，投入液氮，并轉移至保存罐中。(2)胚胎解凍:解凍試劑盒Quinn’s胚胎解凍配套培養基。從液氮罐中取出麥管。在空氣中保持30～40s。投入37℃水浴，30s，直到冰*融化，然后將胚胎移入0.5M蔗糖解凍液中10min，再移至0.2M蔗糖解凍液中5min之后移入HEPES培養基(含10%SPS)中洗7次，后移至預平衡的卵裂培養基中待行輔助孵化。

1.2.4 玻璃化冷凍和解凍法 試劑為瑞典Vitrolife卵裂期胚胎玻璃化冷凍/解凍配套培養基。按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行冷凍及復蘇。(1)胚胎冷凍:所有的操作均在37℃熱臺上進(jìn)行，把胚胎放入基礎液(不含冷凍保護劑)里平衡5～10min，然后將胚胎移入以乙二醇作為冷凍保護劑的培養基中2min，后在含有丙二醇、聚蔗糖和蔗糖為冷凍保護劑的冷凍液中平衡，30s內將胚胎移入低溫冷凍載體(瑞典Vitrolife封閉式載體)上并轉移入液氮中保存。(2)胚胎解凍:把冷凍載體從液氮中取出，然后迅速放入Warm1里10～30s后移入Warm2中1min后，再移入Warm3中平衡2min，后將胚胎置入基礎液中平衡5min，后移入預先平衡的卵裂培養基中等待行輔助孵化。

1.2.5 輔助孵化 顯微激光操作系統。對照組進(jìn)行激光透明帶打孔輔助孵化，選取胚胎卵周隙的大位置持續的以2～3ms的激光能量進(jìn)行激光打孔將部分胚胎透明帶切除掉，需保證中心部分*的穿透透明帶，盡量避免傷害到胚胎細胞，并將胚胎移到培養液滴中置于培養箱保存以等待進(jìn)行移植;研究組進(jìn)行激光透明帶削薄輔助孵化，選取胚胎卵周隙的大位置以4～6ms的激光能量將削薄1/4左右的胚胎透明帶，削掉約50%～80%的透明帶厚度，并防止穿透透明帶，將胚胎移到培養液滴中置于培養箱保存等待進(jìn)行移植。對對照組80例進(jìn)行激光透明帶打孔輔助孵化，對研究組80例進(jìn)行激光透明帶削薄輔助孵化，并且每組均有40例為程序冷凍、40例為玻璃化冷凍。將經(jīng)激光輔助孵化后的卵裂期胚胎在腹部B超的指導下移植到患者的宮腔，并于移植后對患者使用或者HCG進(jìn)行黃體支持。

1.3統計學(xué)分析

使用統計學(xué)軟件SPSS17.0對數據進(jìn)行處理，計量資料使用(x-±s)表示，采用成組t檢驗，計數資料用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統計學(xué)意義。