MVE液氮罐儲存牛凍精的過(guò)程及注意事項

牛的凍精改良技術(shù)是目前使用多、有效的一種繁殖技術(shù)，凍精的正確保存及使用，是保證牛正常受胎的前提之一，在貯存和使用牛凍精時(shí)應注意，下面是利用成都金鳳液氮罐儲存的過(guò)程和注意事項

MVE液氮罐儲存牛凍精保存過(guò)程：

稀釋后的精液，采用逐漸降溫法。在1—1.5h內，使稀釋精液的溫度降到4—5℃;然后再在同溫的恒溫容器內平衡2—4h。平衡、封裝后的細管精液上架碼放是應注意細管擺放方向，把棉塞封口端靠近操作者，超聲波封口端遠離操作者，入冷凍儀時(shí)亦應如此放置。每架上放上根類(lèi)似于細管的標記物，一頭牛用同一顏色的標記物，便于識別。如同一架上有不同牛的細管精液，要分開(kāi)碼放，兩頭牛之間要隔開(kāi)一些距離，以免混淆。

MVE液氮罐儲存牛凍精的過(guò)程及注意事項

冷凍儀是全自動(dòng)冷凍研磨機。冷凍儀與低溫柜應盡量靠近，開(kāi)啟液氮罐閥門(mén)把冷凍儀降溫4℃，關(guān)閉風(fēng)扇電源，待風(fēng)扇*停止后把已排滿(mǎn)待凍細管的架子迅速放入冷凍儀，蓋嚴蓋子按電腦預先設定好的冷凍曲線(xiàn)程序自動(dòng)完成冷凍過(guò)程。如果凍精細管數量不足時(shí)，要填充備用塑料管和細管架以保持冷凍曲線(xiàn)程序自動(dòng)完成冷凍過(guò)程，確保凍精質(zhì)量。

精液冷凍過(guò)程中要求溫度必須直線(xiàn)下降，不得回升。特別是不得進(jìn)入精子冷凍-15—-50℃的危險溫區，使精細胞內出現冰晶而造成精子死亡。

當細管溫度降至-144℃時(shí)，打開(kāi)冷凍儀蓋子，將凍制好的細管凍精取出快速以25支包裝單位裝入特制的塑料拇指管內，迅速浸入液氮中待檢。

解凍后在37℃環(huán)境下前進(jìn)運動(dòng)精子占總精子數的百分率為精子活力。牛冷凍精液的前進(jìn)運動(dòng)精子數是評價(jià)凍精產(chǎn)品質(zhì)量的一項重要指標之一。該項指標不僅與受胎率有關(guān)，而且關(guān)系到凍精產(chǎn)量及種公牛遺傳資源的利用率。因此有效精子數要達到國家標準(GB4143-2008)每劑前進(jìn)運動(dòng)精子數>1500萬(wàn)個(gè)。

解凍溫度如同精液冷凍一樣，冷凍精液在融解過(guò)程中同樣也要順利通過(guò)危險區，不會(huì )對精子造成冰晶損傷，目前常用解凍溫度為38℃左右，解凍10s即可。用紙將解凍后的精液細管擦干，將精液滴在載玻片上進(jìn)行鏡檢，經(jīng)檢查合格的入庫保存，不合格的廢棄。解凍后精液活力應保持在35%以上。

用液氮罐儲存牛凍精的注意事項：

1、牛凍精應貯存于液氮罐的液氮中，設專(zhuān)人保管，每周定時(shí)加一次液氮，并經(jīng)常檢查液氮罐的狀況。

如發(fā)現液氮罐外殼結霜，應立即將凍精轉移入其它液氮罐內保存，包裝好的凍精由一個(gè)液氮罐轉換到另一個(gè)液氮罐時(shí)，在液氮罐外停留的時(shí)間不得超過(guò)3秒，取存凍精后要蓋好液氮罐罐塞，在取放蓋塞時(shí)，要垂直輕拿輕放，不得用力過(guò)猛，防止液氮罐罐塞折斷或損壞，移動(dòng)液氮罐時(shí)，不得在地上拖行，應提起手柄抬起罐體后再移動(dòng)。每頭公牛的凍精應單獨貯存,貯存凍精的容器每年至少清洗一次并更換新鮮液氮。

2、使用冷凍精液時(shí)，應注意公牛的品種、名號及批號、作好記錄。

MVE液氮罐儲存牛凍精的過(guò)程及注意事項

由液氮罐提取精液，精液在液氮罐頸部停留不應超過(guò)10秒，儲精瓶停留部位應在距頸管部8cm以下;顆粒精液在2.9%檸檬酸鈉液1～2mL中，水浴加溫在(40±0.2)℃解凍;細管精液直接投放在(40±0.2)℃溫水中解凍;精液鏡檢在38～40℃的溫度下進(jìn)行，精子活率不應低于30%，每劑量直線(xiàn)運動(dòng)精子數顆粒精液在1200萬(wàn)個(gè)以上，細管精液在1000萬(wàn)個(gè)以上，符合這些標準的精子才可用于輸精。

3、牛冷凍精液現在多用0.25毫升微型細管包裝。用于人工授精的冷凍精液應來(lái)源于系譜齊全、經(jīng)后裔測定的公牛的精液，而不能因為價(jià)廉選用質(zhì)量差的公牛精液。

冷凍精液解凍后，精子活力不低于0.35，精子復蘇率不低于50%，每一劑量直線(xiàn)前進(jìn)的精子數不低于1000萬(wàn)個(gè)，精子畸型率不高于20%，精子頂體完整率不低于40%，無(wú)病原微生物。購買(mǎi)的冷凍精液要在液氮罐中妥善保存，特別要經(jīng)常查看液氮面，及時(shí)補充液氮。

液氮罐儲存牛凍精的過(guò)程及注意事項

液氮罐中轉移冷凍精液注意事項：

從液氮罐中轉移冷凍精液，或者運送冷凍精液時(shí)要應小心，減少精液在室溫狀態(tài)下的時(shí)間，做好不超過(guò)幾秒鐘，因此，用于運輸和儲存容器應并排放置，始終保持在液氮罐霜線(xiàn)下面，而定位，識別和抓取吸管時(shí)，用一個(gè)預冷的止血鉗或鑷子和轉移，將吸管一個(gè)接一個(gè)地快速送到液氮罐。

小心不要將吸管掉進(jìn)罐底部，因為它們在這個(gè)溫度下非常脆，很容易破裂。降低將吸管慢慢地放入罐中然后再加入罐中，重復這個(gè)過(guò)程，直到所有的吸管都裝滿(mǎn)了。