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人眼結膜上皮細胞體外培養和細胞保存的佳方法,建立人結膜上皮細胞系,進(jìn)一步研究人結膜的病理、生理特點(diǎn)及為毒理試驗提供可靠的細胞模型。
方法:分別用組織塊培養法、機械分離法及混合消化液培養法體外培養正常成年人結膜上皮細胞,通過(guò)觀(guān)察細胞形態(tài)、生長(cháng)特性并用原位免疫組化方法鑒定培養細胞;收集第3代和第4代融合的細胞液氮罐凍存,保存30天后復蘇,觀(guān)察復蘇成功率。
這3種取材方法中,混合消化液培養法細胞生長(cháng)繁殖較快,培養細胞形態(tài)多樣,貼壁生長(cháng)。免疫組化染色陽(yáng)性,細胞凍存復蘇的成功率均達到90%。組織塊培養法細胞生長(cháng)比較緩慢,而機械分離法細胞未見(jiàn)貼壁生長(cháng)。
混合消化液培養法是人結膜上皮細胞培養的佳方法,通過(guò)液氮罐凍存可保存培養的人結膜上皮細胞。